| Аннотация |
Цель исследования. Тестирование протокола получения клеточных сфероидов культур рака молочной железы (РМЖ) для биопечати путем наращивания в альгинатных каплях. Материалы и методы. Клетки культур BT-20 и MDA-MB-453 культивировали в среде DMEM с добавлением 10% FBS. Далее клетки снимали с пластика при помощи раствора трипсин-Версена и ресуспендировали в стерильном 2% растворе альгината, приготовленном на DPBS, до концентрации 105 кл/мл. Раствор альгината с клетками исследуемых культур РМЖ медленно капали через иглу 30G в стерильный охлажденный раствор хлорида кальция (100 мМ) с высоты 10 см. После полимеризации альгинатные капли отмывали в среде DMEM и культивировали в течение двух недель в среде DMEM с добавлением 10% FBS при 37°С и 5,0% СО2. Образующиеся в альгинате сфероиды фотографировали на 3-, 7-, 10- и 14-е сутки культивирования, после чего их извлекали из альгината путем выдерживания в 55мМ растворе цитрата натрия с добавлением 20мМ этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) и заключали в парафиновые блоки по стандартной методике с последующим гистологическим исследованием. Результаты. Клеточные сфероиды-клоны образовывались в обеих культурах уже на 3 сутки культивирования. С 3 по 10-е сутки в обеих культурах наблюдался равномерный рост клеточных сфероидов с постепенным замедлением увеличения размеров сфероидов к 14-му дню культивирования. Доля клеток, образовавших клоны (размером более 500 мкм2), на 10-е сутки составила 25,2% ± 7,1% (n = 25) в культуре BT-20 и 38,5% ± 9,9% (n = 25) в культуре MDA-MB-453. На 14-е сутки для ВТ-20 были характерны сфероиды, мало варьирующие по размеру и форме, средней площадью 1652 ± 175 мкм2, обладающие плотной структурой с ровными краями. Сфероиды из клеток культуры MDA-MB-453 оказались более рыхлыми и легко деформирующимися, их размеры и форма заметно варьировали, средняя площадь сфероидов составила 2785 ± 345 мкм2. Заключение. Получение сфероидов в альгинатных каплях уступает по скорости методам формирования клеточных конгломератов в висячих каплях или на микроячейках, однако превосходит эти методы по производительности, которая сравнима с получением сфероидов на низкоадгезивных подложках путем постоянного перемешивания среды. Кроме того, клональная природа получаемых сфероидов приводит к увеличению трат на проведение исследований и ограничивает, тем самым, их масштабируемость |